식품의약품안전처가 한약(생약)의 기원종과 위품을 유전자로 감별하기 위한 분석법 개발·확인 절차를 표준화했다. 정확하게 동정된 표준시료를 확보하는 단계부터 시료 균질화, DNA 추출, 중합효소 연쇄반응(PCR), 실시간 중합효소 연쇄반응(Real-time PCR), 분석법 성능 확인까지 전 과정을 하나의 절차로 정리한 것이 핵심이다. 식품의약품안전평가원은 최근 '한약(생약) 품질관리를 위한 유전자 분석법 마련 표준절차'를 제정했다. 안내서는 한약(생약) 품질관리를 위한 신규 유전자 분석법을 개발하거나 기존 분석법을 활용할 때 필요한 기준과 절차를 제시하기 위해 마련됐다. 이번 표준절차 마련의 배경에는 한약(생약)의 구조적인 오·혼용 가능성이 자리 잡고 있다. 한약(생약)은 기원과 명칭이 유사한 품목이 많고, 규격품 제조 과정에서 절단·건조되면 외형만으로 기원종을 구별하기 어려워진다. 해외 공정서 간에도 품명은 같지만 기원종이 다르거나, 반대로 품명은 달라도 기원종이 같은 사례가 존재해 유통·품질관리 과정에서 혼입이나 대체 사용 가능성을 배제하기 어렵다. 기존에는 외형, 색깔, 맛, 냄새 등을 확인하는 형태학적 분석이나 박층 크로마토그래피(TLC), 액체 크로마토그래피(HPLC) 등을 이용한 이화학적 분석이 활용돼 왔다. 다만 형태학적 감별은 숙련된 전문가의 경험에 의존하고, 이화학적 분석도 종간 패턴 차이나 명확한 지표성분이 없으면 감별하기 어렵다는 한계가 있다. 식약처는 이를 보완하기 위해 DNA 바코드와 차세대염기서열분석(Next-Generation Sequencing, NGS) 등 유전자 분석법을 활용하도록 했다. 형태·이화학적 방법으로 구분하기 어려운 기원종과 위품의 유전자를 비교하고, 종별로 차이가 나타나는 특이 영역을 유전자 분석마커로 활용하는 방식이다. 적용 범위는 한약(생약)과 한약(생약)제제의 기원종 감별을 위한 유전자 분석법뿐 아니라 한약(생약)의 기준·규격 및 안전관리에 관한 분석법까지 포함한다. 신규 분석법을 개발하는 경우와 기존 분석법을 활용하는 경우 모두 적용할 수 있지만, 특정 분야에 별도 규정이 있으면 해당 규정이 우선한다. 분석의 출발。은 신뢰할 수 있는 표준시료 확보다. 표준시료는 정확한 종 동정이 완료된 기원종 및 위품의 표본 시료 또는 DNA로, 종 특이 프라이머 개발 시 양성 대조군이나 시험·검사의 대조용 기준 물질로 사용된다. 모바일 손오공릴게임솔루션 안내서는 국립생물자원관, 국립중앙과학관, 국립생태원, 한국한의학연구원, 한국한의약진흥원 등을 국내 표준시료 동정·제공 기관의 예로 들었다. 시험에 사용한 모든 시료의 수와 출처, 선정 기준을 기록해 시료의 출처와 사용 내역을 추적할 수 있도록 해야 한다. 종 특이 마커를 개발할 때는 표준시료를 개체 단위로 구분해 사용하는 것이 바람직하다. 위품 혼입 여부를 확인하는 시험에서는 검체를 충분히 혼합·균질화하고, DNA 추출 전에 이물질을 최대한 제거해야 한다. 막자사발, 분쇄기, 균질기, 비드 비터 등을 사용할 수 있으며 수분이 많은 시료는 건조하거나 필요에 따라 액체 질소로 분쇄하도록 했다. DNA 추출법은 식물성 한약재와 동물성 한약재의 특성에 따라 구분했다. 식물성 한약재는 세포벽과 다당류, 。액질, 폴리페놀, 색소 등 DNA 추출을 방해하는 성분을 충분히 파쇄·제거하는 것이 중요하다. 뿌리와 뿌리줄기에는 PVP와 β-mercaptoethanol이 포함된 CTAB 완충 용액을 활용하고, 씨는 지방 성분 제거를 위한 에탄올 세척을 추가하는 방식 등이 제시됐다. 동물성 한약재는 단백질, 지방, 키틴 등의 제거가 핵심이다. 안내서는 페놀-클로로폼 혼합 용액을 이용해 DNA·RNA가 존재하는 상층, 변성 단백질이 존재하는 중간층, 지질과 유기용매가 존재하는 하층을 분리한 뒤 상층의 DNA를 회수하는 방법을 안내했다. 다만 검체 특성을 고려해 동등한 결과를 얻을 수 있는 다른 방법이나 상용 DNA 추출 키트도 사용할 수 있다. 추출된 DNA는 농도뿐 아니라 순도도 확인해야 한다. 분광광도계를 사용할 경우 230㎚, 260㎚, 280㎚에서 흡광도를 측정하고, A260/A280 및 A260/A230 값이 1.7∼2.0 범위에 있으면 PCR에 적합한 DNA로 판단한다. DNA 원액은 반복적인 냉동·해동에 따른 손상을 줄이기 위해 사용량별로 분주하며, 장기 보관할 때는 –80℃에 두도록 했다. PCR 분석에서는 식물의 matK·rbcL 등과 동물의 COI 등 DNA 바코드 영역을 활용할 수 있다. 확보한 PCR 증폭 산물의 염기서열은 분석 프로그램으로 정리한 뒤 NCBI-BLAST나 신뢰성 있는 표준시료 기반 데이터베이스와 비교해 종을 동정한다. 상동성과 계통학적 특성을 종합적으로 고려해야 하며, DNA 바코드 영역에서 종 특이 마커를 설계하기 어려우면 NGS 기술을 활용할 수 있다 바다슬롯 먹튀 . 종 특이 마커는 기원종과 위품의 염기서열에서 종 특이 변이가 나타나는 구간을 대상으로 설계한다. 표적 DNA에만 결합하도록 하면서 비특이적 증폭, 프라이머 다이머, 헤어핀과 같은 2차 구조 및 교차 반응을 최소화해야 한다. 개발한 마커는 기원종과 위품에 각각 적용해 증폭 여부나 증폭 산물의 크기가 예상 결과와 일치하는지 확인한다. Real-time PCR은 DNA 증폭 과정에서 발생하는 형광 신호를 측정해 타겟 DNA의 존재 여부와 양을 확인하는 방식이다. 염색 기반의 SYBR Green 방법과 프로브 기반의 TaqMan 방법을 선택할 수 있다. SYBR Green은 melting curve에서 단일 피크가 나타나는지 확인해야 하며, TaqMan 방식은 타겟 특이 프라이머와 프로브를 함께 사용해 위양성을 줄이고 다중 분석에 활용할 수 있다. 분석 결과는 타겟 DNA에서 뚜렷한 증폭 곡선이 나타나고 비타겟 DNA에서는 반응하지 않는지 확인하는 방식으로 평가한다. 안내서는 타겟 DNA의 Ct 값이 낮게 나타나는 사례로 'Ct 30 미만'을 제시했으며, 정량 분석의 표준곡선은 결정계수(R²)가 0.98 이상인지 확인하도록 했다. Multiplex PCR에서는 여러 종 특이 마커 또는 프로브가 서로 간섭하지 않고 독립적으로 증폭되도록 반응액 조성과 증폭 조건을 최적화해야 한다. 개발된 분석법은 선택성, 검출한계, 정밀도 등 성능 특성을 통해 적정성을 확인한다. Conventional PCR은 선택성·검출한계·정밀도를 중심으로 평가하고, Real-time PCR은 여기에 정량한계, 기울기, 증폭효율, 직선성 등을 추가로 확인한다. 선택성은 기원종을 정확히 검출하면서 위품과 다른 종에서는 검출되지 않거나 서로 다른 크기의 산물이 생성되는지를 평가하는 항목이다. 기원종 표준시료에서 일관된 양성 반응이 나타나는 '포괄성'과 위품·비표적 종에서 음성 반응을 보이는 '배타성'으로 나뉜다. 배타성 시험에는 예상 위품뿐 아니라 유전적 근연종과 제조·유통 과정에서 함께 존재할 가능성이 있는 한약(생약)을 포함하는 것이 바람직하다. 한약(생약) 기원종 감별 유전자 분석법의 기준범위는 CODEX 가이드라인을 준용했다. 선택성은 95% 이상, 위양성률과 위음성률은 각각 5% 미만으로 제시됐다. Real-time PCR의 성능 확인 예시에서는 표준곡선 기울기를 –3.3∼–2.9, 증폭효율을 89∼110%, 결정계수는 0.98 이상, 반복성 표준편차(RSDr)는 25% 이하로 설정했다 알라딘체험머니 . 검출한계는 표적 DNA를 단계적으로 희석한 뒤 반복 시험해 결정한다. Conventional PCR에서는 가장 낮은 희석 농도에서 양성 반응이 나타나는 농도를 검출한계 95%의 근사값으로 설정할 수 있다. Real-time PCR은 통계적으로 95% 이상의 확률로 양성 결과가 나타나는 최저 DNA 농도를 검출한계로 삼을 수 있다. 분석법 확인 수준은 사용 목적과 검증 범위에 따라 3단계로 구분했다. 수준 1은 소비자 민원, 단발성 부적합 시료, 특정 기원종 혼입 의심 등 긴급하거나 제한적인 상황에서 단일 실험실이 최소한의 선택성과 검출한계를 확인하는 단계다. 수준 2는 개발 실험실이 선택성, 검출한계, 실험실 내 반복성 등을 체계적으로 평가하는 '실험실 내 확인' 단계다. 수준 3은 개발 실험실과 최소 1개 이상의 협력 실험실이 참여해 분석법의 실험실 간 적용 가능성을 평가한다. FDA의 2023년 핵산 기반 분석법 검증 가이드라인을 한약(생약) 종 동정용 PCR 분석에 맞게 수정한 예시에서는 수준 1은 1개 실험실·1개 이상 시료, 수준 2는 1개 실험실·3개 이상 시료, 수준 3은 2개 이상 실험실·3개 이상 시료를 요구한다. 모든 수준에서 반복수는 3회 이상이다. 다만 안내서는 이를 최소 요구사항을 제시한 참고용 예시로 규정하고 시험 목적에 따라 유연하게 적용하도록 했다. 다만 Real-time PCR의 실험실 간 재현성 기준은 안내서 내 표기가 일치하지 않는다. 본문은 정량한계를 제외한 동적 범위에서 상대 재현성 표준편차(RSDR)를 35% 미만으로 설명하고 참고 기준표도 35% 이하로 제시했지만, 표 7에는 25% 이하로 기재돼 있다. 실제 시험계획을 수립하거나 자료를 제출할 때는 해당 기준에 대한 식약처의 확인이 필요해 보인다. 이번 안내서 제정으로 연구기관과 시험·검사기관, 한약(생약) 관련 업체는 분석 목적에 맞는 표준시료 선정부터 성능 확인까지 일관된 틀에서 시험법을 설계할 수 있게 됐다. 특히 전문가의 형태 감별이나 지표성분 분석만으로 구별하기 어려웠던 절단·건조 한약재와 유사 기원종에 대해 유전자 수준의 확인 절차를 구체화했다는 .에서 품질관리의 재현성과 객관성을 높이는 기반이 될 것으로 보인다. 다만 이 안내서는 법적 구속력을 갖는 규정은 아니다. 2026년 7월 현재의 과학적·기술적 사실과 유효한 법규를 토대로 식약처의 입장을 설명한 민원인 안내서로, 향후 법규 개정이나 개별 시료의 특성에 따라 적용 방식이 달라질 수 있다. 값이 1.7∼2.